Trong quá trình nuôi cấy, các dòng tế bào động vật có xu hướng thay đổi đặc tính di truyền khi nuôi cấy liên tục. Các dòng tế bào hữu hạn thì sẽ lão hóa dần. Tất cả các loại môi trường nuôi cấy tế bào đều dễ bị nhiễm vi khuẩn. Và, những sự cố thiết bị luôn có thể xảy ra dù với phòng thí nghiệm hiện đại nhất. Điều quan trọng là khi một dòng tế bào được thiết lập thì nó nên được xem là một nguồn tài nguyên quý giá và sự thay thế nó sẽ rất tốn kém và mất thời gian. Chính vì những lý do vừa nêu, chúng ta cần thực hiện trữ đông tế bào động vật.
Phương pháp tốt nhất để trữ đông tế bào động vật là bảo quản chúng trong nitơ lỏng trong
môi trường hoàn chỉnh với sự có mặt của chất bảo vệ lạnh như dimethylsulfoxide (DMSO). Chất bảo quản lạnh làm giảm điểm đóng băng của môi trường và cũng cho phép
tốc độ làm lạnh chậm hơn, giảm đáng kể nguy cơ hình thành tinh thể băng. Tinh thể băng có thể làm hỏng và gây chết tế bào.
Nội dung
Các chỉ dẫn quan trọng khi trữ đông tế bào động vật
Thực hiện theo các chỉ dẫn dưới đây là điều cần thiết để trữ đông tế bào động vật của bạn và sử dụng trong tương lai.
- Trữ đông các tế bào nuôi cấy của bạn ở nồng độ cao và ở số lần cấy chuyền thấp nhất có thể. Đảm bảo rằng tỷ lệ các tế bào sống ít nhất 90% trước khi trữ đông. Lưu ý rằng điều kiện trữ đông tối ưu phụ thuộc vào dòng tế bào sử dụng.
- Làm đông lạnh các tế bào từ từ bằng cách giảm nhiệt độ xuống khoảng 1°C mỗi phút. Có thể sử dụng máy làm lạnh kiểm soát được tốc độ hoặc thùng làm lạnh chuyên dụng.
- Luôn sử dụng môi trường trữ đông được khuyến cáo. Môi trường trữ đông phải chứa một tác nhân bảo vệ lạnh như DMSO hoặc glycerol (xem Cấy chuyền tế bào động vật).
- Trữ đông các tế bào dưới mức -70oC; các tế bào đông lạnh sẽ bắt đầu thoái hóa nếu nhiệt độ tăng trên -50°C.
- Luôn luôn sử dụng ống chịu nhiệt độ âm sâu và vô trùng để lưu trữ các tế bào đông lạnh. Các ống này có thể được trữ ngâm trong nitơ lỏng hoặc trong pha khí trên nitơ lỏng. Lưu ý: Ống chứa vật liệu nguy hiểm sinh học phải được lưu trữ trong pha khí trên nitơ lỏng. Việc này sẽ loại bỏ nguy cơ nổ ống chứa. Nếu bạn chọn phương pháp trữ ngâm trong ni tơ lỏng, bạn cần cảnh giác nguy cơ nổ các ống chứa bằng thủy tinh hoặc nhựa và luôn luôn đeo mặt nạ hoặc kính bảo hộ.
- Luôn mặc đồ bảo hộ cá nhân.
- Tất cả các dung dịch và dụng cụ tiếp xúc với các tế bào phải được vô trùng. Luôn luôn tuân thủ kỹ thuật vô trùng thích hợp và làm việc trong tủ cấy vô trùng.
Môi trường trữ đông tế bào động vật
Luôn luôn sử dụng môi trường đông lạnh được khuyến cáo để trữ đông các tế bào của bạn. Môi trường này nên chứa một chất bảo vệ lạnh như DMSO hoặc glycerol. Thông thường, các loại môi trường trữ đông chuyên dụng sẽ có một tỷ lệ tối ưu giữa huyết thanh thai bò (FBS) và huyết thanh bò để cải thiện khả năng sống và phục hồi của tế bào sau khi rã đông.
Mời các bạn theo dõi video sau để nắm rõ hơn về quy trình trữ đông tế bào động vật.
Nội dung bài viết được tham khảo từ ThermoFisher Scientific dịch và chỉnh sửa bởi sinhhocphantu.net.
5,707 total views, 2 views today
